您知道有哪些對(duì)ELISA試劑盒測(cè)定結(jié)果有影響的原因嗎?

ELISA試劑盒方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測(cè)定，具有靈敏度高，操作簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)，但是在具體實(shí)驗(yàn)過(guò)程中影響因素較多，并且要按照嚴(yán)格的說(shuō)明要求，在檢驗(yàn)中除正常反應(yīng)外，有時(shí)常可見(jiàn)到一些錯(cuò)誤結(jié)果（即假陽(yáng)性或假陰性結(jié)果）

影響ELISA測(cè)定錯(cuò)誤結(jié)果的原因主要有：

①標(biāo)本因素；

②試劑因素；

③操作因素。

研域小編就標(biāo)本因素對(duì)ELISA測(cè)定的影響做如下總結(jié)。

一、類風(fēng)濕因子

人血清中IgM、IgG型類風(fēng)濕因子（RF）可以與ELISA系統(tǒng)中的捕獲抗體及酶標(biāo)記二抗的FC段直接結(jié)合，從而導(dǎo)致假陽(yáng)性。

解決辦法

1.用F（ab）2替代完整的IgG；

2.標(biāo)本用聯(lián)有熱變性（63℃，10 min）IgG的固相吸附劑處理（將熱變性IgG加入到標(biāo)本稀釋液中同樣有效）；

3.檢測(cè)抗原時(shí)，可以用2-巰基乙醇等加入到標(biāo)本稀釋液中，使RF降解。

二、補(bǔ)體

ELISA系統(tǒng)中固相一抗和標(biāo)記二抗過(guò)程中，抗體分子發(fā)生變構(gòu)，其FC段的補(bǔ)體C1q分子結(jié)合位點(diǎn)被暴露出來(lái)，使C1q 可以將二者連接起來(lái)，從而造成假陽(yáng)性。

解決辦法

1.用EDTA稀釋標(biāo)本；

2.用53℃，10 min或56℃，30 min加熱血清使C1q滅活。

三、嗜異性抗體

人類血清中含有能與嚙齒類動(dòng)物（如鼠等）Ig（s） 結(jié)合的天然嗜異性抗體，可將ELISA系統(tǒng)中一抗和二抗連接起來(lái)，也能造成假陽(yáng)性。

解決辦法

可在標(biāo)本稀釋液中加入過(guò)量的動(dòng)物Ig（s），但加入量不足或亞類不同時(shí)無(wú)效。

四、嗜靶抗原的自身抗體

抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素等嗜靶抗原的自身抗體，有時(shí)能與靶抗原結(jié)合形成復(fù)合物，在ELISA方法中均可干擾抗原抗體測(cè)定結(jié)果。

解決辦法

測(cè)定前需用理化方法將其解離后再測(cè)定。