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        ELISA實驗“溫育”操作是不是只能在37℃條件下完成

        發(fā)布時間: 2016-01-25  點擊次數(shù): 2723次

        溫育是ELISA試劑盒測定中影響測定成敗zui為關鍵的一個因素。ELISA實驗作為一種固相免疫測定,抗原抗體的結(jié)合反應在固相上進行,要使液相中的抗原或抗體與固相上的特異抗體或抗原*結(jié)合,必須在一定的溫度條件下反應一定的時間。溫育所需時間與溫度成反比,即溫度越高,則所需時間相對較短。在ELISA中一般有兩次抗原抗體反應,即加標本和加酶結(jié)合物后??乖贵w反應的完成需要有一定的溫度和時間,這一保溫過程稱為溫育(incubation),也被稱之為孵育。這是一個逐步平衡的過程,因此需經(jīng)擴散才能達到反應的終點。在其后加入的酶標記抗體與固相抗原的結(jié)合也同樣如此。

        溫育常采用的溫度有43℃、37℃、室溫和4℃(冰箱溫度)等。37℃是實驗室中常用的保溫溫度,也是大多數(shù)抗原抗體結(jié)合的合適溫度。實驗表明,兩次抗原抗體反應一般在37℃經(jīng)1-2小時,產(chǎn)物的生成可達。為加速反應,可提高反應的溫度,ELISA試劑盒有些試驗在43℃進行,但不宜采用更高的溫度??乖贵w反應4℃更為*,在放射免疫測定中多使反應在冰箱中放置一晚上,以形成zui多的沉淀。但因所需時間太長,在ELISA中一般不予采用。

         

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